Методы осаждения ДНК


MolBiol.ru > Методы > Клонирование > Методы осаждения ДНК

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · ·

Zbio-wiki

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

Другие методы осаждения ДНК(РНК) - PEG, Zn, CTAB

Осаждение ДНК PEG
Осаждение ДНК Zn
Осаждение ДНК CTAB

Дополнить

Осаждение ДНК PEG

Удобный метод для переосаждения DNA после расщепления RNase.

оптимальные условия:

PEG => 13%
MgCl₂ => 10mM

10' NT;
ЦФ 10' NT.

Выход

~0.1 µg/ml => ~70%
>1 µg/ml => ~95-100%

Можно использовать вариант осаждения (5%PEG, 0.6M NaCl – конечные концентрации).
Эффективно осаждаются только >150bp фрагменты.
От PEG можно отмыться 2х70% EtOH.

Осаждение ДНК Zn

убедиться, что образец:

* содержит по крайней мере 5mM Tris (Cl, Borat, Acetate), pH7.0-8.5,
* и не содержит >0.1mM EDTA;

+ NaP до 0.1-1.0mM фосфата;
+ 0.1M ZnCl₂

для V<500 µl -> 1/20,
для V>500 µl -> 1/100;

смешать, 15' NT;
ЦФ 5';
ресуспензировать осадок в буфере с минимум 1mM EDTA (pH не больше 8.0).

При таком осаждении осаждается всё: DNA, RNA, белки, бактерии.
Осаждение плазмидной DNA: от 0.1 µg/ml; олигонуклеотидов (20b) от 10 µg/ml.

Осаждение CTAB

DNA + CTAB (из 5% стока) до 0.25-1.4%;
2'-ON NT;
ЦФ 10'.
растворить в буфере с высокой ионной силой, переосадить спиртом.

CTAB (Cetrimide CH₃(CH₂)₁₅N(CH₃)₃Br, Mw=364.5)
CTAB — сильный детергент. Он эффективно разрушает ДНК — белковые комплексы. Комплекс нуклеиновых кислот с CTAB растворим только в высокой соли (2M LiCl, 1M NaCl). Для очистки нуклеиновых кислот раствор нуклеиновых кислот в 1.5M NaCl, 2% CTAB можно экстрагировать хлороформом. CTAB образует нерастворимый комплекс с DNA при концентрации соли ниже, чем 0.5M (выпадает в осадок при добавлении 2-2.5V EtOH или 0.7V изопропанола). Полисахариды, мембраны, фенолы и т. п. при этом не осаждаются. После осаждения, для очистки от остатков CTAB требуется переосаждение, осадок лучше сполоснуть 80% спиртом (CTAB в нём растворим).

MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 24152

Дополнения, комментарии, вопросы

Люди знающие! Здесь недостаёт того, что знаете вы, но не знал или забыл автор. Этой страницей пользуются ваши коллеги. Пожалуйста, поделитесь с ними опытом. Пригодится всё, что поможет в работе.

Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/

-- как прислать био-картинку --

Дата последней модификации: 30/07/13

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ИСТОРИЯ ЗООМУЗЕЯ

· Викимарт - все интернет-магазины в одном месте · Доска объявлений Board.com.ua ·

--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---

--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru · redactor@molbiol.ru · реклама