Метод особенно хорош для низкокопийных плазмид. Качество получается практически такое же как и при очистке в градиенте CsCl, но работы меньше и ультрацентрифуга не нужна. Методика занимает 2-3 дня.
Из 450ml среды выделялось ~0.1mg низкокопийной плазмиды. Наращивание биомассы лучше делать на LB среде, обогащенные среды типа 2xYT ухудшают качество выделения.
Хлорамфеникол = левомицетин (при покупке в аптеке). Прислала taniusha.
По пунктам
п. 4.
Глюкоза добавляется из соображений гуманности к бактериям после хлорамфеникола .
п. 14.
LiCl селективно осаждает RNA. Таким образом избавляются от большей части примеси РНК в препарате.
п. 23.
Колонку можно сделать из стеклянной пипетки на 10ml.
п. 26.
Диализ необходим только при многократном использовании колонки, как ее не промывай, следы CsCl остаются и мешают ферментативным реакциям.
А можно на фильтрах 100 kD, это гораздо быстрее. Сконцентрировать раствор ДНК с помощью фильтра до 0.2ml, а затем трижды добавлять ТЕ буфер по 0.3ml.
MolBiol.ru >
Методы >
Плазмиды > Выделение низкокопийных плазмид
Zbio-wiki
Дополнить
.